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      研磨儀快速提取動物組織中的總RNA實驗

      時間:2020-07-09?? 作者:admin?? 來源:上海凈信?? 點擊:163次
        一、實驗目的:快速提取動物組織中的總RNA(18S,28S;離心吸附柱不吸附5S)

        二、實驗器材及試劑:研磨儀,離心管,移液槍,電泳槽凝膠成像等;無水乙醇,液氮,瓊脂糖。

        三、實驗材料:雞肉組織。




        四、實驗步驟

        1)雞肉組織

        2)鮮組織用解剖刀迅速切成小碎離心管中,加入小號研磨珠,將管子蓋嚴后放入液氮中冷凍,設置參數,點擊運行即可開始研磨。

        3)取適量組織細粉轉入裝有組織裂解液RLT的離心管中,用手劇烈振蕩若干秒,充分裂解。用帶鈍針頭的一次性注射器抽打裂解物若干次或直到得到滿意勻漿結果(或者電動勻漿若干秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高產量。

        4)將勻漿后裂解物離心,沉淀可能存在的裂解困難的碎片或者不溶物,將裂解物上清小心轉到一個新離心管。

        5)接操作步驟項下3。

        6)較精確估計裂解物(上清)體積,加入等體積的乙醇(請先檢查是否已加入無水乙醇!),此時可能出現沉淀,但是不影響提取過程,立即吹打混勻,不要離心。

        7)立刻將混合物加入一個吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)離心60秒,棄掉廢液。

        8)加去蛋白液RW1,室溫放置幾秒,離心30秒,棄掉廢液。

        9)如果DNA殘留明顯,可在加入RW1后室溫放置幾分鐘再離心。

        10)加入漂洗液RW(請先檢查是否已加入無水乙醇!),離心30秒,棄掉廢液。加入漂洗液RW,重復一遍。

        11)將吸附柱RA放回空收集管中離心2分鐘,盡量除去漂洗液,以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。

        12)取出吸附柱RA,放入一個RNase free離心管中,根據預期RNA產量在吸附膜的中間部位加30-50μl RNase free water,室溫放置1分鐘,離心1分鐘。

        13)如果預期RNA產量>30μg,加30-50μl RNase free water重復步驟8,合并兩次洗脫液,或者使用第一次的洗脫液加回到吸附柱重復步驟一遍(如果需要RNA濃度高)。

        14)洗脫兩遍的RNA洗脫液濃度高,分兩次洗脫合并洗脫液的RNA產量比前者高15–30%,但是濃度要低,用戶根據需要選擇。

        五、實驗結果:提取的雞肉組織RNA點樣量為1ul,雞肉組織RNA兩個條帶亮度相當,提示出現降解。

        實驗結果圖
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